大鼠心肌細胞的消化

　　取一只加蓋燒杯，內放一塊用乙醚飽和的紗布，把0~3日齡的大鼠幼鼠放進該燒杯中麻醉，用2%碘酒和75%酒精消毒胸腹皮膚，在無菌條件下開胸取出心臟，立即置于4ºCD-Hanks液(mmol/L：Nacl137,Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌，洗凈殘血，剪成約1mm³大小的組織塊，棄去D-Hanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml，于37°C靜置5min，吸出上層懸液，并加入等量的含血清培養基。經終止消化后離心(1800r/min)棄上清液，加入含血清的培養液。吹散沉淀細胞，同條件下離心，用10%血清培養液制成細胞懸液，置于37°C含5%CO2培養箱中。

心肌細胞分離

　　根據心肌細胞(大鼠心肌細胞)和非心肌細胞貼壁時間的不同采用2小時差速貼壁，分別獲得心肌成纖維細胞和心肌細胞。心肌細胞按1*106個細胞/ml種于50ml培養液中，培養的前2天在心肌細胞培養液中加入5-溴脫氧嘧啶核苷0.1mmol/l，以抑制非心肌細胞增殖，所有培養的心肌細胞均每2天換液一次。

　　1.3心肌細胞的無血清培養

　　當心肌細胞(大鼠心肌細胞)培養24小時后換無血清培養液（含DMEM培養液，胰島素10?g/ml,鐵蛋白10?g/ml，維生素C100?g/L維生素B121.5µmol/L）繼續培養48小時,每隔8小時換液一次,盡量保持各添加成分濃度不變,*后收集細胞,進行測定。

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